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什么是ELISA，ELISA目的及實(shí)驗(yàn)方法有哪些?
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。
ELISA應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地?cái)U(kuò)大，原則上ELISA可用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。
擴(kuò)展資料 ：
ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線最高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)值，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。
ELISA也可應(yīng)用于病毒抗體檢測(cè)：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過(guò)目前常用的檢測(cè)方法。此外，還可用于鑒定病毒型別，例如皰疹病毒。
ELISA目的是檢測(cè)血清中特定的抗原，以達(dá)到定性判斷的目的。
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunosorbent assay(簡(jiǎn)寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。
ELISA分類方法：
1、夾心法
夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原。
2、間接法
間接法常用于檢測(cè)抗體。
3、競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原。
ELISA實(shí)驗(yàn)所有方法的缺點(diǎn)很明顯：
1、重復(fù)性不好;
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽(yáng)性;
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時(shí)間。
1、直接法(directELISA)
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)略，因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào)，但不是每種抗體都適合做符號(hào)，費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。
2.間接法(indirectELISA)
此測(cè)定辦法與直接法相似，不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào)，改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
優(yōu)勢(shì)：二抗能夠加強(qiáng)信號(hào)，并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
3.雙抗體夾心法(sandwichELISA)
被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶符號(hào)后直接測(cè)定抗原的量;或不符號(hào)，再透過(guò)酶符號(hào)的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗原聯(lián)系部位。
優(yōu)勢(shì)：高活絡(luò)、高專一性，抗原無(wú)須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。
4.競(jìng)爭(zhēng)法(competitiveELISA)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過(guò)程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來(lái)與只要固定抗原的對(duì)照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢(shì)：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
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