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  如何正確使用凍存管進(jìn)行細(xì)胞凍存?
  以下是細(xì)胞凍存管使用的關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng),結(jié)合實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作流程:
  1. ?凍存前準(zhǔn)備?
  細(xì)胞狀態(tài)?:選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(融合度80%-90%)的細(xì)胞,復(fù)蘇后兩周內(nèi)凍存效果佳。
  凍存液配制?:
  含血清凍存液?:培養(yǎng)基與血清比例通常為1:1(難培養(yǎng)細(xì)胞可提高血清比例),需搭配程序降溫盒使用?。
  無(wú)血清凍存液?:可直接使用商品化凍存液(如逸漠生物、普美品牌),無(wú)需梯度降溫?。
  凍存管選擇?:2mL凍存管建議裝1mL細(xì)胞懸液,避免體積過(guò)大導(dǎo)致冷卻不均?。
  2. ?細(xì)胞處理與分裝?
  消化與離心?:胰酶消化后,800-1200rpm離心5分鐘,棄上清保留細(xì)胞沉淀?。
  重懸分裝?:加入預(yù)冷凍存液輕柔吹打,分裝至凍存管并標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)、日期?。
  3. ?降溫與保存?
  梯度降溫?(含血清凍存液適用):
  4℃ 30分鐘 → -20℃ 2小時(shí) → -80℃過(guò)夜 → 液氮長(zhǎng)期保存?。
  直接凍存?(無(wú)血清凍存液適用):分裝后直接放入-80℃冰箱,24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至液氮?。
  4. ?關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
  防爆管?:液氮保存時(shí)優(yōu)先選擇內(nèi)旋蓋凍存管,避免液氮滲入導(dǎo)致爆管。
  復(fù)蘇驗(yàn)證?:凍存后需復(fù)蘇驗(yàn)證細(xì)胞活性,-80℃保存不超過(guò)半年。
  擴(kuò)展資源?:
  含血清凍存液需定期更換異丙醇(程序降溫盒內(nèi))?。
  懸浮細(xì)胞凍存需調(diào)整離心參數(shù)(如1000rpm)。
  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
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