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ELISA實驗前準備
ELISA實驗前準備確實關鍵,確保你操作時心里有底。實驗前準備的核心是?試劑平衡、樣本處理、標準品稀釋和板條準備?,每一步都需嚴格按規范操作,避免因細節疏漏影響結果。
一、試劑平衡與檢查
試劑盒平衡?:從冷藏取出的試劑盒需在室溫(25℃左右)平衡15-30分鐘,避免溫度波動影響活性。
洗滌液處理?:若濃縮洗滌液有結晶,可在37℃水浴中加溫助溶,稀釋后不影響結果。
試劑保存?:底物需避光保存,封板膜僅一次性使用,酶標包被板開封后未用完的板條應裝入密封袋中保存。
二、樣本與標準品準備
樣本處理?:新鮮標本應盡早檢測,若需長期保存需分裝后儲存在-20℃或-80℃,避免反復凍融。若樣本中待測物質含量過高(OD值大于標準品高孔),需用樣品稀釋液稀釋n倍后測定,計算時需乘以總稀釋倍數(×n×5)。
標準品稀釋?:按說明書要求梯度稀釋標準品,推薦設置6個濃度梯度(如640pg/ml、320pg/ml、160pg/ml、80pg/ml、40pg/ml、0pg/ml),每個濃度做復孔以減少誤差。
三、板條準備
從鋁箔袋中取出所需板條后,立即將剩余板條與干燥劑一起重新密封保存,防止受潮。
將板條穩固地放置于板架上,避免因板條放置不穩導致加樣誤差。
四、其他注意事項
試劑復溫與平衡?:
所有試劑(包括檢測抗體、酶結合物、顯色液、標準品等)從冰箱取出,室溫(20-25°C)平衡至少20分鐘。過冷的試劑會導致吸光度值偏低、標準曲線線性不佳,并可能因冷凝造成孔內液體濃度變化。
試劑配制?:
嚴格按照說明書配制洗滌液、標準品等。洗滌液若為濃縮液,需使用超純水或蒸餾水準確稀釋,確保pH和離子強度正確,避免結晶或污染。
注:以上僅供參考,本產品僅供科研使用,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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