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大鼠苗條素受體(LROb-R)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
BS-2971 大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒
一、試劑盒簡介
大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒是一種基于雙抗體夾心法原理設(shè)計(jì)的酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，用于定量測定大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及相關(guān)液體樣本中苗條素受體的含量?。該試劑盒通過特異性抗體捕獲目標(biāo)抗原，再與酶標(biāo)記抗體結(jié)合形成復(fù)合物，最終通過顯色反應(yīng)進(jìn)行定量分析?。
二、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法：
將純化的大鼠苗條素受體抗體包被于微孔板，形成固相抗體
加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，其中的LR/Ob-R與固相抗體結(jié)合
加入HRP標(biāo)記的LR/Ob-R抗體，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物
洗滌后加入TMB底物顯色，在HRP酶催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，酸作用下轉(zhuǎn)為黃色
顏色的深淺與樣品中LR/Ob-R濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值?
三、試劑盒組成
試劑盒通常包含以下組分(48T/96T兩種規(guī)格)：
微孔酶標(biāo)板?：8孔×6條(48T)或8孔×12條(96T)，預(yù)包被抗體?
標(biāo)準(zhǔn)品?：濃度通常為2700ng/L或72ng/L(不同批次可能有差異)，0.3mL-0.5mL×6管?
檢測抗體-HRP?：5mL(48T)/10mL(96T)?
樣本稀釋液?：3mL(48T)/6mL(96T)?
20×洗滌緩沖液?：15mL(48T)/25mL(96T)，使用前需稀釋?
顯色劑?：A液和B液各3mL(48T)/6mL(96T)?
終止液?：3mL(48T)/6mL(96T)?
封板膜?：2張?
說明書?：1份?
四、樣本采集與處理
1. 樣本類型
適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、尿液、胸腹水、腦脊液等?
2. 樣本處理方法
血清?：全血室溫放置2小時或4℃過夜后，1000g離心20分鐘取上清?
血漿?：EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)2-8℃ 1000g離心20分鐘?
細(xì)胞培養(yǎng)上清?：1000g離心20分鐘取上清?
組織勻漿?：用PBS(pH7.2-7.4)制備10%勻漿，10000g離心5分鐘取上清?
3. 樣本保存
短期(48小時內(nèi))可2-8℃保存
長期應(yīng)分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融?
溶血樣本不宜檢測?
五、實(shí)驗(yàn)步驟
試劑準(zhǔn)備?：
從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘?
配制洗滌液：將20mL濃洗滌液加蒸餾水稀釋至600mL(30倍)?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：按說明書梯度稀釋(通常設(shè)5-7個濃度點(diǎn))?
加樣?：
設(shè)空白孔(僅加樣本稀釋液)、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔
分別加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣本?
孵育?：
37℃孵育90分鐘?
棄去液體，拍干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)5次?
加酶標(biāo)試劑?：
每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體(空白孔加稀釋液)
37℃孵育60分鐘?
同上洗滌5次?
顯色?：
每孔加入50μL顯色劑A，再加50μL顯色劑B
37℃避光顯色15-30分鐘?
終止與測定?：
每孔加入50μL終止液
15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長測定OD值?
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?
根據(jù)樣本OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度?
若樣本稀釋過，需乘以稀釋倍數(shù)?
也可用回歸方程計(jì)算：將OD值代入方程Y=aX+b，求出X值?
七、注意事項(xiàng)
試劑保存?：
未開封試劑盒2-8℃保存，有效期內(nèi)使用?
開封后未用完板條應(yīng)立即密封，加干燥劑保存?
操作規(guī)范?：
不同批次試劑不可混用?
使用一次性吸頭避免交叉污染?
避免顯色劑接觸金屬器械?
洗滌要充分，拍干時避免吸水紙直接接觸孔內(nèi)?
質(zhì)量控制?：
建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做雙復(fù)孔?
顯色過淺可適當(dāng)延長溫育時間?
若OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)調(diào)整樣本稀釋比例重新測定?
儀器要求?：
使用精確的移液器(0.5-10μL, 20-200μL, 200-1000μL)?
酶標(biāo)儀需提前預(yù)熱并校準(zhǔn)?
八、技術(shù)參數(shù)
檢測范圍?：通常為15-1000ng/L(不同品牌可能有差異)?
靈敏度?：通常5[6
精密度?：
板內(nèi)變異系數(shù)<10%
注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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