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大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理
基于雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù),具體流程如下:
固相抗體包被?
微孔板預(yù)先包被抗VEGF-C單克隆抗體,形成固相捕獲抗體?。
抗原-抗體結(jié)合?
加入待測(cè)樣本(如血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清),樣本中的VEGF-C與固相抗體特異性結(jié)合,形成“固相抗體-VEGF-C"復(fù)合物?。
酶標(biāo)抗體反應(yīng)?
加入生物素標(biāo)記的抗VEGF-C多克隆抗體(檢測(cè)抗體),與已結(jié)合的VEGF-C結(jié)合,形成“固相抗體-VEGF-C-酶標(biāo)抗體"夾心結(jié)構(gòu)?。
信號(hào)檢測(cè)?
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后,加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素(鏈霉親和素-HRP)?。
加入底物TMB(四甲基聯(lián)苯胺),HRP催化TMB顯色(藍(lán)色→黃色),顏色深淺與VEGF-C濃度成正比?。
酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度?。
關(guān)鍵特性?:
檢測(cè)范圍通常為15.6–1000pg/ml?。
特異性針對(duì)VEGF-C亞型(,避免與其他VEGF家族成員交叉反應(yīng)?。
適用于科研實(shí)驗(yàn)
注意事項(xiàng)?:
樣本需避免反復(fù)凍融,血清/血漿樣本需使用無熱原試管收集?。
實(shí)驗(yàn)重復(fù)性要求板內(nèi)變異系數(shù)<10%,板間<15%?。
注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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